Identificació de sucres per cromatografia en capa fina (TLC)

Identificació de sucres per cromatografia en capa fina

Fonament

Aquesta modalitat de cromatografia es porta a terme en plaques de vidre, alumini o polièster sobre les quals s’ha estès la fase estacionària sobre la qual s’ha de moure la fase mòbil, formant una capa fina d’espessor variable segons els casos, encara que habitualment és de 0,25 mm. Aquesta fase estacionària s’ha d’escollir segons les substàncies que s’han de separar; es pot emprar alúmina, gel de sílice, cel·lulosa, etc.

1. Objectiu

Identificar els sucres presents en mostres alimentàries mitjançant la tècnica de cromatografia en capa fina.

Procediment

Material

• Fase estacionària: cromatoplaçes de sílica gel.
• Eluent: Es preparen per separat les dissolucions següents i es barregen:

• Mesurar 25 mL d'1-butanol
• Mesurar 12,5 mL d'àcid acètic
• Afegir 12,5 mL d'aigua destil·lada
• Posar 25 mL d’aquesta fase mòbil dins la càmera cromatogràfica i tancar-la per saturar la càmera amb els vapors que es desprenen. (fer a la campana)

• Preparació de l’agent revelador: solució d’àcid sulfúric en solució d’etanol i aigua 1:1
• Mesurar 20 mL d'etanol
• Afegir 20 mL d'aigua destil·lada
• Afegir 1 mL d’àcid sulfúric concentrat

• Patrons:
• Pesar 0,05 g dels patrons
• Dissoldre en 2 mL d'aigua destil·lada
• Posar en tub d'assaig

• Mostres:
• Mesurar 1 mL de mostra
• Afegir 5 mL de dissolució etanol:aigua 1:4
• O posar la mostra directament a la placa.

Procediment: Preparació de la placa

• Traceu la línia base, amb llapis, a 2 cm de l’extrem inferior i una línia superior, amb llapis, a 1 cm de l’extrem superior. Front de l’eluent.
• Feu una senyal a la línia base cada 1 cm. Seran els punts on dipositareu els patrons o mostres. Rotuleu a cada marca el nom del patró i mostra.
• Dipositeu patrons i mostres amb una micropipeta. El diàmetre de la gota sobre la placa no pot ser superior a 5 mm. Assequeu cada vegada que es diposita la gota per tal d’evitar que les taques s’expandeixin massa i es solapin. Dipositeu un parell de cops cada patró o mostra.
• Col·loqueu la cromatoplaca a l’interior de la cubeta procurant no moure l’eluent. A partir d’aquest moment i fins que s’acabi l’elució, no moure la cubeta per res.
• Un cop arribat el front d’elució a la senyal marcada, traieu la cromatoplaca i apliqueu l’spray revelador.
• Deixeu la cromatoplaca a l’estufa a 100 ºC fins a veure les taques definides (aprox. 10 min).