Mètodes d'aïllament microbiològic: sembra per esgotament i per dilució

Resum

El document descriu els mètodes bàsics per aïllar microorganismes en medi sòlid. Explica la sembra per esgotament (en estria simple o ziga-zaga, en estria múltiple, en 4 quadrants i en 3 girs), que redueix progressivament la quantitat de cèl·lules sobre la placa, i la sembra per dilució, que distribueix un inòcul molt diluït per obtenir colònies ben aïllades. Cada mètode inclou els passos a seguir.

Punts clau

La sembra per esgotament arrossega amb la nansa de Kolle un nombre cada cop menor de microorganismes per obtenir colònies aïllades.
En la sembra en estria simple o ziga-zaga es fa una sola passada sobre la superfície del medi i després s'incuba la placa invertida.
La tècnica dels 4 quadrants consisteix a sembrar cada quadrant creuant l'última part del quadrant anterior, esterilitzant la nansa entre quadrants.
La tècnica dels tres girs fa tres sèries d'estries girant la placa uns 90 graus, sense flamejar la nansa entre girs.
En la sembra per dilució s'utilitzen dilucions decimals i se sembren normalment 0,1 mL de les més diluïdes.

Posa't a prova

Mètodes d'aïllament per sembra per esgotament

Aquests mètodes es basen a arrossegar amb la nansa de Kolle un nombre cada cop més petit de microorganismes sobre un medi sòlid en placa de Petri. L'objectiu és aconseguir colònies aïllades.

Sembra en estria simple o ziga-zaga

Esterilitzar la nansa de Kolle i deixar-la refredar al costat del fogonet.
Prendre una alíquota del cultiu (líquid o sòlid) amb la nansa de sembra.
Realitzar la sembra en estria simple o ziga-zaga sobre la superfície del medi.
Esterilitzar la nansa.
Incubar la placa en posició invertida.

Sembra en estria múltiple

Esterilitzar la nansa de Kolle i deixar-la refredar al costat del fogonet.
Prendre una alíquota del cultiu (líquid o sòlid) amb la nansa de sembra i sembrar la primera estria.
Esterilitzar la nansa entre cada estria (sense tornar a agafar mostra) i realitzar les estries successives creuant l'anterior.
Esterilitzar la nansa.
Incubar la placa en posició invertida.

Sembra mitjançant la tècnica dels 4 quadrants

Esterilitzar la nansa de Kolle i deixar-la refredar al costat del fogonet.
Prendre una alíquota del cultiu (líquid o sòlid) amb la nansa de sembra.
Rotular els 4 quadrants a la base de la placa.
Sembrar el primer quadrant. Esterilitzar la nansa i sembrar el segon quadrant creuant l'última part del primer. Repetir per al tercer i quart quadrant, esterilitzant la nansa entre cadascun.
Esterilitzar la nansa.
Incubar la placa en posició invertida.

Sembra mitjançant la tècnica dels tres girs

Esterilitzar la nansa de Kolle i deixar-la refredar al costat del fogonet.
Prendre una alíquota del cultiu (líquid o sòlid) amb la nansa de sembra i fer una estria inicial.
Girar la placa aproximadament 90 graus i fer una segona sèrie d'estries creuant l'anterior. Girar de nou i fer una tercera sèrie d'estries. Important: Sense flamejar la nansa a cada gir.
Esterilitzar la nansa.
Incubar la placa en posició invertida.

Mètodes d'aïllament per sembra per dilució

Es tracta de sembrar en placa un nombre de microorganismes prou petit perquè, en créixer, cadascun d'ells doni lloc a una colònia ben aïllada.

Preparar una sèrie de dilucions decimals del cultiu utilitzant el diluent adequat (p. ex., NaCl 0,9%; Ringer ¼).
Sembrar 0,1 mL de les dilucions que es considerin adequades (normalment les més diluïdes) en la superfície d'una placa amb agar solidificat.
Realitzar una extensió homogènia de l'inòcul amb la nansa de Drigalski estèril.
Incubar les plaques en posició invertida.
Observar les colònies aïllades per diferenciar-les i procedir a l'obtenció de cultius purs a partir d'una sola colònia.

Preguntes freqüents

Què és la sembra per esgotament?

És un mètode d'aïllament que arrossega amb la nansa de Kolle un nombre cada cop més petit de microorganismes sobre un medi sòlid en placa de Petri, per obtenir colònies aïllades.

Quina quantitat de mostra es sembra en la sembra per dilució?

Normalment es sembren 0,1 mL de les dilucions considerades adequades, que solen ser les més diluïdes, sobre la superfície d'una placa amb agar solidificat.

Quina és la diferència entre la sembra per esgotament i la sembra per dilució?

En l'esgotament es redueix el nombre de microorganismes arrossegant-los amb la nansa; en la dilució es sembra en placa un nombre prou petit perquè cada microorganisme doni una colònia aïllada.